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嚴(yán)格使用一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶

發(fā)布日期: 2018-11-25
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  嚴(yán)格使用一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶

  一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH 7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下,一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色。

  溫馨提示:請嚴(yán)格按照此步驟操作,否則可能會出現(xiàn)一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞生長空白區(qū)域,即所謂的“生長空洞”。多數(shù)用戶使用的不是的預(yù)包被一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶,而是普通的一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿,其表面環(huán)境并不利于無血清培養(yǎng)環(huán)境下的間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁。37℃放置5-10分鐘,可讓培養(yǎng)基中的促貼壁物質(zhì)更好地與一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部結(jié)合,使得間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁能力增強,降低“生長空洞”出現(xiàn)的概率。

  細(xì)胞消化:將一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立放置,吸走培養(yǎng)基,如果培養(yǎng)基中的脫落細(xì)胞較多,說明細(xì)胞現(xiàn)在很容易脫落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),來回輕微晃動培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞*脫落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混勻,不能吹打,分裝2瓶,如果細(xì)胞沒長滿就脫落,則只需加入5mlMEM,不分裝。如果培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞貼壁較牢固,培養(yǎng)基上清沒有細(xì)胞脫落碎片,且細(xì)胞長滿達(dá)到80%以上,吸走培養(yǎng)基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速輕微晃動,豎立培養(yǎng)瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超過3min,細(xì)胞*消化脫壁,取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻,分裝2瓶。

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